ABSTRACT Neospora caninum is an important worldwide parasite responsible for causing abortion in animals. Due to limited information on the occurrence of infection by this parasite in the state of Rondônia, Brazil, this study aimed to determine the seroprevalence and identify the risk factors associated with the infection in slaughtered cattle, from 19 municipalities distributed in seven microregions of the state. A total of 494 samples were obtained and subjected to anti-N. caninum antibodies, using the Indirect Immunofluorescence Reaction technique. Antibodies were detected in 5.06% (25/494) of the samples, in 30.30% (10/33) of farms, in nine municipalities located in four microregions of Rondônia. Of all the animals analyzed, 4.81% of the females (20/416) and 6.41% of the males (05/78) were seropositive for the parasite, with “abortion in the last 12 months” being considered an important risk factor for the occurrence of infection (OR = 9.54; p = 0.01). The present study points out the prevalence of anti-N. caninum antibodies in 5.06% of slaughtered animals and abortion as the main risk factor associated with infection by N. caninum, thus contributing to the elucidation of the epidemiology of this protozoan in Rondônia, Brazil.

RESUMO Neospora caninum é um importante parasito, responsável por causar aborto em animais e distribuído mundialmente. Devido às informações limitadas sobre a ocorrência da infecção por esse parasito no estado de Rondônia, Brasil, este estudo teve como objetivo determinar a soroprevalência e identificar os fatores de risco associados à infecção em bovinos abatidos, oriundos de 19 municípios, distribuídos em sete microrregiões do estado. Um total de 494 amostras foi obtido e submetido à pesquisa de anticorpos anti-N. caninum, por meio da técnica de reação de imunofluorescência indireta. Os anticorpos foram detectados em 5,06% (25/494) das amostras, em 30,30% (10/33) das propriedades rurais, de nove municípios, localizados em quatro microrregiões de Rondônia. De todos os animais analisados, 4,81% das fêmeas (20/416) e 6,41% dos machos (05/78) foram soropositivos para o parasito, sendo o “aborto nos últimos 12 meses” considerado um importante fator de risco para a ocorrência da infecção (OR = 9,54; P = 0,01). O presente estudo aponta a prevalência de anticorpos anti-N. caninum em 5,06% dos animais abatidos e o aborto como o principal fator de risco associado à infecção por N. caninum, contribuindo assim para a elucidação da epidemiologia desse protozoário em Rondônia, Brasil.

RESUMO Galinhas criadas ao ar livre podem ingerir oocistos de T. gondii presentes no ambiente e, com isso, albergar cepas virulentas desse parasita em diferentes tecidos, sem sinais clínicos. O isolamento de T. gondii por meio de bioensaios em camundongos e gatos, a partir de tecidos de galinhas naturalmente infectadas, tem sido descrito em vários países. Isso demonstra a importância das galinhas caipiras na epidemiologia desse parasita. O objetivo deste trabalho foi caracterizar genotipicamente isolados de T. gondii obtidos de galinhas caipiras naturalmente infectadas em uma área rural do município de Santa Maria, estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Fragmentos de cérebro e de coração, de 12 galinhas soropositivas para T. gondii, foram processados pela técnica de digestão péptica para isolamento do parasita. Das 12 amostras submetidas a bioensaio com camundongos, nove isolados foram obtidos. A caracterização genotípica por RFLP-PCR foi realizada utilizando-se 11 marcadores genéticos: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 e Apico e revelou a presença de cinco genótipos atípicos de acordo com o ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 e # 163). Os resultados mostraram uma ampla diversidade genética de T. gondii em galinhas caipiras nessa região.

ABSTRACT Free-range chickens may ingest oocysts of T. gondii present in the environment and consequently harbor virulent strains of this parasite in different tissues, without any clinical signs. Isolation of T. gondii through bioassays on mice and cats from naturally infected chicken tissues has been described in several countries, demonstrating the importance of free-range chickens in the transmission of this parasite. The aim of this study was the genotypic characterization of T. gondii isolates obtained from naturally infected free-range chickens in a rural area of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Brain and heart tissue from 12 chickens seropositive for T. gondii were processed using peptic digestion technique for parasite isolation. From 12 samples subjected to mouse bioassay, nine isolates were obtained. RFLP-PCR genotypic characterization was performed using 11 genetic markers: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 and Apico. Genetic characterization of the isolates revealed the presence of five atypical genotypes according to ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 and # 163). Our results showed a wide genetic diversity of T. gondii in free-range chickens in this region.

RESUMO A toxoplasmose é uma zoonose de ampla distribuição, que acomete animais homeotérmicos, incluindo as aves e o ser humano. Galinhas podem ser consideradas indicadoras de contaminação ambiental. No Brasil, Toxoplasma gondii não apresenta estrutura populacional clonal (I, II e III), ocorrendo alta frequência de recombinação, o que resulta na grande diversidade genética observada. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar geneticamente T. gondii de galinhas (Gallus domesticus) naturalmente infectadas do estado de Santa Catarina. Soros de 133 aves criadas extensivamente foram analisados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos IgG contra T. gondii. Para o isolamento do parasito (bioensaio em camundongos), foram utilizados coração e cérebro de 30 aves que apresentaram títulos maiores que 64 na RIFI. Os isolados obtidos foram submetidos à caracterização genotípica por meio da RFLP-PCR utilizando 12 marcadores genéticos (SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3). Os resultados obtidos foram classificados de acordo com os genótipos presentes no ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Das 133 amostras de soros de galinha analisadas, 84 (63,16%) foram positivas, com títulos de anticorpos variando de 16 a 1024. No bioensaio, foram obtidos 11 isolados (Ck 3, Ck 32, Ck 35, Ck 56, Ck 63, Ck 89, Ck 102, Ck 103, Ck 125, Ck127 e Ck 128). A análise genotípica revelou a presença de seis genótipos, três dos quais classificados como #26, #53 e #120, e três, NEO1, NEO2 e NEO3, não descritos anteriormente. Nenhuma linhagem clonal I, II ou III foi encontrada. O presente trabalho confirma a ampla diversidade genética do parasito observada no Brasil.

ABSTRACT Toxoplasmosis is a widespread zoonosis that can infect warm-blooded animals including birds and humans, and chickens are considered to be indicators of environmental contamination. In Brazil, Toxoplasma gondii has a non-clonal population structure composed of three lineages (I, II, and III), presenting high recombination, and resulting in wide genetic diversity. This study aimed to genetically characterize T. gondii isolates from naturally infected chickens (Gallus domesticus) in Santa Catarina state, southern Brazil region. Sera from 133 free-range chickens were analyzed by an immunofluorescence assay (IFA) to detect IgG antibodies against T. gondii. Brain and heart from 30 positive animals, based on IFA (≥ 1:64), were used to isolate the parasite using a mouse bioassay. Strain genotyping was performed by PCR-RFLP using 12 genetic markers (SAG1, 5´-3´SAG2, alt. SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico, and CS3). The results were classified according to the genotypes based on the ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Of 133 chicken sera analyzed, 84 (63.16%) were positive, with antibody titers ranging from 16 to 1024. Eleven isolates were obtained from mouse bioassay (Ck3, Ck32, Ck35, Ck56, Ck63, Ck89, Ck102, Ck103, Ck125, Ck127, and Ck128). Genotyping revealed six genotypes; three were classified as #26, #53, and #120, and three (NEO1, NEO2, and NEO3) were had not been previously described. No clonal lineages of type I, II, or III were identified. The present study confirms the high genetic diversity of T. gondii in Brazil.

O agente de maior importância, em relação à anaplasmose bovina, é o Anaplasma marginale. Os principais sinais clínicos dessa enfermidade são anemia hemolítica, icterícia, dispneia, taquicardia, febre, fadiga, lacrimejamento, sialorreia, micção frequente, anorexia, perda de peso, aborto e morte. A terapia antimicrobiana é o principal protocolo terapêutico. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a eficácia do dipropionato de imidocarb, da enrofloxacina e do cloridrato de oxitetraciclina no tratamento de bovinos leiteiros naturalmente infectados por Anaplasma marginale. Para isso, foram avaliados 48 zebuínos mestiços que apresentavam os sinais clínicos sugestivos da doença. Os animais foram submetidos à coleta de sangue para a realização de hemograma e à extração de DNA para a confirmação da presença de A. marginale, por meio da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Os animais foram divididos em três grupos experimentais, para realização dos protocolos terapêuticos, utilizando-se dipropionato de imidocarb, oxitetraciclina e enrofloxacina. Trinta e seis animais (75%) apresentaram reação positiva ao PCR. Os animais positivos não apresentaram diferenças significativas quanto ao hemograma e ao leucograma quando comparados com os negativos, no entanto os níveis de proteínas séricas foram inferiores nos animais positivos (P<0,05). Os três protocolos terapêuticos foram capazes de reduzir a infecção ao longo do tratamento (P<0,01), porém, após cinco dias de tratamento, a enrofloxacina apresentou maior efetividade em relação aos demais (P<0,01). Após o final do tratamento, nenhum protocolo foi capaz de eliminar totalmente a infecção pelo A. marginale em bovinos naturalmente infectados e manejados a campo.

Anaplasma marginale is the most important agent regarding cattle anaplasmosis. The main clinical signs of this disease are hemolitic anemia, jaundice, dyspnea, tachycardia, fever, fatigue, lacrimation, salivation, frequent urination, anorexia, weight loss, abortion and death. Antimicrobial therapy is the main therapeutic protocol. The aim of this paper was to assess the efficacy of this therapy frequently used in field conditions. In order to do so, 48 crossbred zebu cattle presenting suggestive clinical signs of the disease were assessed. The animals were submitted to blood sample collection to perform a CBC and DNA extraction to confirm the presence of A. marginale by the polymerase chain reaction (PCR) test. The animals were divided into three experimental groups to perform the therapeutic protocols, using imidocarb dipropionate, enrofloxacin and oxytetracycline. Thirty-six animals (75%) presented positive reaction to PCR. The positive animals do not present significant differences in the CBC and WBC when compared to the negative ones. However, the serum protein levels were lower in positive animals (P<0.05). All the treatments were able to reduce the infection throughout the treatment (P<0.01). However, in time 1, enrofloxacin presented greater effectiveness in relation to the other ones (P<0.01). After the end of the treatment no protocol was able to totally eliminate the infection by A. marginale in cattle naturaly infected and handled on the field.

Com os objetivos de verificar a ocorrência de anticorpos contra Neospora caninum em bovinos de corte da microrregião de Guara-puava, Paraná, e de correlacioná-la com a idade, o sexo e a raça dos animais, amostras de sangue de 250 bovinos foram analisadas por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (> 1:200). A análise estatística foi realizada por meio dos testes exato de Fisher e de qui-quadrado (p<0,05) para correlacionar os resultados da sorologia com as variáveis analisadas. Das 250 amostras avaliadas, 33 (13,2%) foram positivas para N. caninum. Os títulos obtidos para N. caninum foram 1:200 (8), 1:400 (14) e 1:800 (11). Animais soropositivos estavam presentes em 40% (10/25) das propriedades avaliadas. Os resultados demonstram ampla distribuição do protozoário entre os rebanhos bovinos de corte na região de Guarapuava, PR. Animais sem raça definida apresentaram maiores índices de soropositivos para N. caninum (P = 0,002). A idade apresentou associação positiva com a ocorrência de anticorpos contra N. caninum (P = 0,02), indicando que a transmissão horizontal tem importante papel na epidemiologia do coccídio.

Occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in blood samples of 250 bovine beef cattle of the microrregion of Guarapuava, Paraná State was verified by Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) (> 1:200) and correlated to age, sex and breed of animals. The statistical analysis was carried out through Fisher's Exact and qui-square tests (p < 0.05) to associate the results of the serology with the analyzed variables. From 250 evaluated samples, 33 (13.2 %) were positive for N. caninum. The titles obtained for N. caninum were 1:200 (8), 1:400 (14) and 1:800 (11). Seropositives animals were present in 40% (10/25) of the evaluated properties. These results demonstrate wide distribution of the protozoa among the beef cattle in the region of Guarapuava, PR. Animals without defined breed showed higher rates of seropositives for N. caninum (P = 0.002). The age had positive association with the incidence of antibodies against N. caninum (P = 0.02), indicating that horizontal transmission plays an important role in the epidemiology of this coccidia.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de anticorpos contra Leptospira spp. em bovinos, caninos, equinos, ovinos e suínos, oriundos de 40 propriedades localizadas na área rural do Município de Jaguapitã, Estado do Paraná. Foram colhidas amostras de sangue de 370 bovinos, 161 equinos, 70 ovinos, 230 suínos e 97 caninos. O número de animais testados em cada propriedade, assim como o número de propriedades, foi determinado utilizando-se o programa Epi-info versão 6. As amostras de soros obtidas foram submetidas à prova de soroaglutinação microscópica (SAM) com 22 sorovares de Leptospira spp. Das 40 propriedades rurais pesquisadas, 38 (95,00%) tiveram pelo menos um animal sororeagente na SAM e dos 928 animais estudados, 316 (34,08%) apresentaram títulos ? 100. A prevalência observada na espécie bovina foi de 42,43%, com 87,18% das propriedades apresentando pelo menos um animal sororeagente. As prevalências de animais e propriedades reagentes para as demais espécies foram, respectivamente, 48,44% e 87,18% para equinos; 38,57% e 100% para ovinos; 18,70% e 28,00% para suínos; 11,34% e 31,25% para cães. O sorovar mais provável encontrado em bovinos foi Hardjo, em equinos Castellonis e Sentot, em ovinos, suínos e cães Icterohaemorrhagiae. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que as cinco espécies animais estudadas na área rural do Município de Jaguapitã tiveram contato com vários sorovares de Leptospira spp. Além disso, os resultados sorológicos sugerem uma possível transmissão do micro-organismo entre espécies animais, provavelmente em decorrência da exposição às mesmas fontes de infecção entre os animais estudados.

ABSTRACT The objective of this work was to determine the prevalence of antibodies against Leptospira spp. in cattle, dogs, horses, sheep and swine from 40 properties located in the rural area of Jaguapitã, state of Paraná, Brazil. Blood samples were taken from 370 cattle, 97 dogs, 161 horses, 70 sheep and 230 swine. The number of animals tested on each property, as well as the number of properties was determined using the program Epi-info version 6. Samples of serum were submitted to microscopic agglutination test (MAT) with 22 Leptospira spp. serovars. From the 40 rural properties investigated, 38 (95.00%) had at least one positive animal according to SAM, and from 928 studied animals, 316 (34.08%) presented titers ? 100. The prevalence observed in the bovine species was 42.43%, with 87.18% of the properties presenting at least one positive animal. The prevalence of animals and properties reactive for the other species were, respectively: 48.44% and 87.18% for horses; 38.57% and 100% for sheep; 18.70% and 28.00% for swine; 11.34% and 31.25% for dogs. The most frequent serovar in bovines was Hardjo, in horses Castellonis and Sentot, in sheep, swine and dogs Icterohaemorrhagiae. The results obtained in this study demonstrated that the 5 studied animal species in the rural area of Jaguapitã had contact with several Leptospira spp. serovars. Moreover, serological results suggest a possible transmission of Leptospira spp. between animal species, probably because of exposure to the same sources of infection among the animals studied.

Avaliou-se a presença de T. gondii em cortes comerciais de carne suína (pernil, lombo, costela e paleta), por meio do bioensaio e PCR, em animais experimentalmente inoculados. Dois grupos (G) foram formados. Os animais do G1 (n=10) foram inoculados com 4 x10(4) oocistos da cepa VEG e os do G2 (n=8) permaneceram como grupo-controle, não inoculado. Todos os animais foram abatidos no dia 59 após a infecção, quando foram colhidas as amostras de carne para a realização das provas de bioensaio e da PCR. Todos os suínos do G1 apresentaram-se positivos a pelo menos um dos testes de diagnóstico ou a ambos, e os do grupo-controle permaneceram negativos. Não houve diferenças significativas em relação aos tipos de cortes comerciais e à presença do parasita no bioensaio (P>0,05). O bioensaio foi capaz de detectar T. gondii em 27/40 (67,5%) amostras e a PCR em 9/40 (22,5%). O estudo mostrou diferença entre o bioensaio e a PCR (P<0,01).

The distribution of T. gondii in commercial cuts of pork (ham, tenderloin, spareribs and arm picnic) by PCR and bioassay from experimentally infected pigs, was evaluated. Eighteen mixed breed pigs were divided into two groups (G). The G1 animals (n=10) were infected with 4 x10(4) oocysts of the T. gondii VEG strain and the G2 animals (n=8) were used as control. Pigs of both groups were slaughtered at 59th day after infection, and meat samples were collected for bioassay and PCR. All animals from G1 were positive by at least one or both tests, and all control animals were negative. T. gondii was identified in pork by mouse bioassay and PCR in 27/40 (67.5%) and in 9/40 (22.5%) of the evaluated samples, respectively. There were no statistical differences in the distribution of tissue cysts from commercial cuts of pork by bioassay (P>0.05). However, statistical differences were observed when mouse bioassay and PCR were compared (P<0.01).

Um dos principais objectivos da produção em estufa é a obtenção de plantas, em quantidade e qualidade, que de outro modo não seria possível devido às condições adversas do meio exterior. No entanto, de modo a obter no interior da estufa as condições de temperatura e humidade adequadas é normalmente necessário recorrer a técnicas de condicionamento ambiental, como sejam, a ventilação e o aquecimento. Neste trabalho pretendeu-se estudar a influência de diferentes sistemas de aquecimento, por ar quente e por água quente, nas condições de ambiência no interior de uma estufa localizada numa zona Mediterrânica continental. Além disso, pretendeuse também comparar o efeito destes sistemas de aquecimento na ocorrência de condensação. Este é um aspecto de grande importância já que a condensação pode ser um factor favorável à proliferação de determinadas doenças criptogâmicas, responsáveis por avultadas perdas de produção. O trabalho experimental foi realizado numa estufa localizada em Madrid na Escola Técnica Superior de Engenheiros Agrónomos. A estufa era multitúnel tendo o tecto a forma elipsoidal. A área da estufa era 132 m ² e o material de cobertura metacrilato com 3 mm de espessura. O sistema de ventilação consistia em aberturas contínuas laterais e zenitais. Esta estufa estava equipada com dois sistemas de aquecimento, termoventiladores (ar quente) e solo radiante (água quente). Foram recolhidos dados relativos à temperatura e humidade relativa do ar no interior e no exterior, bem como da ocorrência de condensação na parte interna da cobertura da estufa. Todos os dados foram registrados com intervalos de 5 minutos, durante vários dias. Verificou-se que a humidade relativa e os períodos em que ocorreu condensação são bastante menores quando se utilizou o aquecimento por ar quente. Ambos os sistemas foram comparados relativamente ao consumo energético. Para as mesmas condições climáticas exteriores, o sistema de aquecimento por água quente apresentou maior consumo energético que o sistema de aquecimento por ar quente, nas condições testadas.

One of the main objectives of the greenhouse production is to obtain a good performance of the crops, which would not be possible outside due to adverse conditions of the environment. However, to achieve suitable internal air temperature and humidity it is usually necessary to use environmental control techniques, as ventilation or heating. The objectives of this work were: 1. to study the effect of the different heating systems, pipe and air, in the climatic conditions in a Mediterranean greenhouse and 2. to study the influence of these different heating systems on the occurrence of condensation. External and internal climatic data were collected as the occurrence of condensation on internal surface of the cover material. All data were registered in a Data Logger each 5 minutes, during several days. With air heaters, inside relative humidity was lower comparing to pipe heating. Both strategies were compared concerning the energy consumption. For the same outside conditions, pipe heating presented higher levels of energy consumption than air heaters. With air heaters, the condensation rate on the inner surface of the cover was strongly reduced.